Заказ 0
На данный момент у Вас ни одной заявки. Пожалуйста, перейдите в каталог, чтобы выбрать товар.
На данный момент у Вас ни одной заявки. Пожалуйста, перейдите в каталог, чтобы выбрать товар.
С тех пор как ЛАЛ-тест получил коммерческое использование в 1970-х годах, он стал стандартом для определения бактериальных эндотоксинов в фармацевтической промышленности. После того, как появился гель-тромб тест, были разработаны и другие методы, и сегодня у пользователей есть широкий выбор быстрых и чувствительных методов, которые отвечают большинству задач.
Однако, из-за биологической природы анализа, все методы проведения ЛАЛ-теста до сих пор имеют некоторые проблемные места, с которыми могут столкнуться пользователи, в том числе:
Анализ с реактивом PyroGene рекомбинантным фактором С – это инновационный метод определения эндотоксинов, который использует рекомбинантную технологию для элегантного улучшения реакции, лежащей в основе ЛАЛ-теста. Реактив PyroGene содержит рекомбинантную форму фактора С, чувствительного к эндотоксинам белка, который инициирует ферментативный каскад реакций, ведущих к образованию геля. Рекомбинантный фактор С активируется связыванием с эндотоксинами по такому же механизму, как и традиционный ЛАЛ-тест. Анализ проходит в один этап, и по окончанию реакции в конечной точке измеряется количество флуорогенного субстрата, который выделился в результате ферментативной реакции.
В анализе с реактивом PyroGene не используется гемолимфа мечехвостов в качестве сырья для производства реактива, и фармацевтической промышленности предлагается надежный метод определения эндотоксинов, не зависящий от животных. В 2009 году FDA было одобрено 510 статей на препараты, в которых анализ с рекомбинантным фактором С был заявлен как конечный анализ на бактериальные эндотоксины.
В анализе с рекомбинантным фактором С активированный эндотоксинами фактор С непосредственно отрезает флуорогенный субстрат, производя сигнал, который может быть измерен с помощью стандартного флуоресцентного планшетного фотометра. Диапазон измерения концентрации эндотоксинов с использованием реактива PyroGene составляет от 10 ЕЭ/мл до 0,005 ЕЭ/мл с большим разрешением, чем привычные кинетические анализы.
Реактив PyroGene включает фактор С, который представляет собой тот же фактор С из клеток крови мечехвостов, но полученный рекомбинантно. Рабочий реактив получают путем смешивания раствора фактора С, буфера и флуорогенного субстрата, таким образом, исключается традиционный шаг разведения ЛАЛ-реактива. Эта технология позволяет использовать компоненты набора более гибко, так как аналитик может приготовить смесь реактивов точно на необходимое ему число анализов.
Анализ с использованием реактива PyroGene – это количественный анализ, который проводят в 96-ти луночном планшете. Планшет инкубируют в микропланшетном ридере при температуре 37 °С, в котором затем измеряют флуоресценцию с возбуждением/излучением при длине волны 380/440 нм. В присутствии эндотоксинов активированный фактор С отрезает флуорогенный субстрат, вызывая в растворе флуоресценцию.
Источником получения традиционного ЛАЛ-реактива являются белки, содержащиеся в амебоцитах (клетках крови) мечехвостов. Так как ЛАЛ-реактив получают из сырья, имеющего биологическую природу, используемые клетки крови мечехвостов показывают вариабельность от серии к серии. На эту вариабельность влияют различия между разными животными, сезонные изменения и факторы окружающей среды.
Поскольку реактив PyroGene рекомбинантный фактор С – это аналог фактора С, содержащегося в амебоцитах мечехвостов, только полученный искусственным путем, он сохраняет в себе всю чувствительность к эндотоксинам, за которую известен ЛАЛ-реактив. Однако, так как он получен синтетическим путем, данный реактив содержит только фактор С и не содержит других факторов свертывания, которые присутствуют в традиционном каскаде ферментативных реакций у мечехвостов. Таким образом, реактив PyroGene обладает большей стабильностью состава от серии к серии.
Стандартные калибровочные кривые, построенные с разными сериями реактива PyroGene, показывают отличительное постоянство. Благодаря этому аналитик получает более воспроизводимые результаты и меньший разброс по значениям для положительного контроля препарата.
Метод анализа с рекомбинантным фактором С не требует использования клеток крови мечехвостов и предлагает альтернативный традиционному ЛАЛ-тесту метод, который позволит уменьшить использование животных для определения эндотоксинов.
Исследования показали, что фактор С способен селективно распознавать и связывать эндотоксины. Реактив PyroGene содержит рекомбинантный фактор С, который специфически активируется эндотоксинами. В отличие от ЛАЛ-реактива, реактив PyroGene не содержит фактор G, который реагирует с глюканами. В ЛАЛ-тесте степень реактивности фактора G может различаться в зависимости от производителя и состава лизата. Реактив PyroGene не взаимодействует с глюканами, таким образом, исключается возможность получения ложноположительных результатов.
