Биохимический реактив, получаемый из лизированных амебоцитов (клеток крови) мечехвостов вида Limulus Polyphemus. Обладает высокой чувствительностью к бактериальным эндотоксинам и используется для определения их содержания в лекарственных препаратах и активных фармацевтических субстанциях.
Обозначается греческой буквой λ. Выражена в единицах эндотоксина на миллилитр, ЕЭ/мл и соответствует минимальной концентрации Международного стандарта эндотоксина, которая вызывает образование плотного геля при реакции с данным реактивом (в гель-тромб тесте), или соответствует точке с минимальным значением на стандартной кривой (в фотометрических методах анализа).
Очищенный липополисахарид, полученный из штамма E. Coli. Активность контрольного стандарта эндотоксина установлена по международному стандарту эндотоксина. Используется для подтверждения заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива и для постановки контролей. Активность контрольного стандарта выражается в Единицах эндотоксина (ЕЭ).
Фрагменты клеточных стенок грамотрицательных бактерий. Представляют собой сложные липополисахаридные комплексы. При попадании в организм человека через парентеральный путь введения вызывают пирогенный ответ (повышение температуры тела). Так как грамотрицательные бактерии вездесущи по своей природе, бактериальные эндотоксины могут попадать в лекарственные препараты в процессе их производства из фармацевтических субстанций, лабораторной посуды, воды, производственного оборудования.
Для приготовления растворов ЛАЛ-реактива, контрольного стандарта эндотоксина и разведений испытуемого лекарственного препарата используют воду для ЛАЛ-теста. Вода для ЛАЛ-теста должна соответствовать требованиям, предъявляемым к воде для инъекций, и при этом не должна содержать бактериальные эндотоксины в количествах, определяемых в тесте.
Метод проведения ЛАЛ-теста, в котором результаты анализа определяются визуально. Анализ проводят в стеклянных пробирках размером 10х75 мм, в которых смешиваются равные части ЛАЛ-реактива и испытуемого препарата. Пробирки с реакционной смесью инкубируют в водяной бане или термоблоке при температуре 37°С ± 1 °С в течение одного часа. По истечении времени инкубирования результаты определяются визуально: если в пробирках образовался плотный гель, который не стекает при однократном переворачивании пробирки на 180О, то результат засчитывается как положительный. Если в пробирке остался раствор или образовался гель, который стекает при переворачивании пробирки, то результат реакции считается отрицательным. Гель-тромб тест – это самый простой метод проведения ЛАЛ-теста, который не требует приобретения дорогостоящего оборудования. Освоение ЛАЛ-теста проще всего начинать именно с этого метода.
Задачей этого анализа является подтверждение того, что содержание бактериальных эндотоксинов в испытуемом образце не превышает значения предельного содержания бактериальных эндотоксинов, указанного в фармакопейной статье. В качественном гель-тромб тесте испытуемый препарат проверяется в двух повторностях в одном выбранном разведении. Если в этом разведении получены положительные результаты, то содержание эндотоксинов в данном препарате более или равно фактору этого разведения, умноженному на чувствительность используемого ЛАЛ-реактива.
Этим методом определяют содержание бактериальных эндотоксинов с помощью ряда последовательных разведений испытуемого лекарственного средства. В анализ ставится серия последовательных двукратных разведений препарата, не менее четырех разведений. Положительный контроль испытуемого препарата (контроль ингибирования) ставится для наименьшего разведения испытуемого препарата, так как ингибирование прямо зависит от концентрации испытуемого препарата в растворе. В анализе определяется конечная точка реакции для каждой повторности. Конечная точка реакции – это наименьшее разведение для каждой повторности, в которой еще происходит образование геля. Концентрация бактериальных эндотоксинов в испытуемом препарате для каждой повторности рассчитывается как произведение фактора разведения для конечной точки реакции на чувствительность ЛАЛ-реактива. Далее рассчитывается среднее геометрическое значение для всех повторностей, как в опыте «Подтверждение заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива».
Если для всех разведений испытуемого препарата получены отрицательные результаты, то содержание бактериальных эндотоксинов будет менее значения фактора разведения наименьшего разведения, умноженного на чувствительность ЛАЛ-реактива.
Если для всех разведений испытуемого препарата получены положительные результаты, то содержание бактериальных эндотоксинов будет более или равно значению фактора разведения наибольшего разведения, умноженного на чувствительность ЛАЛ-реактива.
Допустимое содержание бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве, указанное в фармакопейной статье. Для расчета предельного содержания бактериальных эндотоксинов используют следующую формулу:
Предельное содержание бактериальных эндотоксинов = К / М, где:
К — пороговая пирогенная доза, равная 5 ЕЭ/кг в 1 час для испытуемого лекарственного препарата (если он вводится пациенту любым парентеральным путем, кроме интратекального). При интратекальном пути введения лекарственного препарата К составляет 0,2 ЕЭ/кг;
М — максимальная терапевтическая доза испытуемого лекарственного средства, вводимая в течение одного часа (выражается в мг, мл или ЕД на 1 кг массы тела).
Для радиофармацевтических лекарственных препаратов, вводимых внутривенно, предельное содержание бактериальных эндотоксинов рассчитывают как 175/V, где V – максимальная рекомендованная доза в мл. Для радиофармацевтических лекарственных препаратов, вводимых интратекально, предельное содержание бактериальных эндотоксинов равняется 14/V.
Для лекарственных препаратов, доза которых рассчитывается на м2 поверхности тела (например, противоопухолевые препараты), пороговая пирогенная доза (К) составляет 100 ЕЭ/м2 .
Максимально допустимое разведение (МДР) представляет собой наибольшее разведение испытуемого лекарственного средства, в котором возможно определение концентрации эндотоксина, соответствующей значению предельного содержания бактериальных эндотоксинов, установленному для данного лекарственного средства. МДР – это такое разведение испытуемого препарата, в котором можно сделать однозначный вывод о соответствии/несоответствии лекарственного препарата требованию раздела «Бактериальные эндотоксины».
Испытуемое лекарственное средство может быть проверено в одном разведении или в серии разведений при условии, что конечная степень разведения не превысит значения МДР, которое рассчитывается по формуле:
где:
«предельное содержание бактериальных эндотоксинов» — допустимое содержание бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве, указанное в фармакопейной статье;
«концентрация испытуемого раствора» — концентрация лекарственного средства или действующего вещества, для которого указано предельное содержание бактериальных эндотоксинов
λ — чувствительность ЛАЛ-реактива, в ЕЭ/мл.
Представляет собой испытуемый препарат в выбранном разведении, к которому добавлен эндотоксин в концентрации, в два раза превышающей чувствительность используемого ЛАЛ-реактива (то есть, 2 λ). Данный контроль должен быть положительным и позволяет удостовериться в том, что испытуемый препарат в выбранном разведении не ингибирует реакцию гелеобразования.
Представляет собой воду для ЛАЛ-теста, к которой добавлен эндотоксин в концентрации, в два раза превышающей чувствительность используемого ЛАЛ-реактива (то есть, 2 λ). Данный контроль должен быть положительным и позволяет удостовериться в том, что ЛАЛ-реактив и контрольный стандарт эндотоксина не потеряли своих свойств в процессе транспортировки и хранения.
Представляет собой воду для ЛАЛ-теста. Данный контроль должен быть отрицательным и позволяет удостовериться в том, что все используемые в опыте материалы не содержат бактериальные эндотоксины в определяемых в тесте количествах.
Ничего не найдено :( Попробуйте ввести, к примеру, лал-реактив