Рекомбинантные реактивы

В последние годы были разработаны рекомбинантные реактивы, воспроизводящие ферментативную реакцию в амебоцитах мечехвостов. Первым в этом ряду реактивов появился рекомбинантный фактор С. Это полученный синтетическим путем первый фермент, Фактор С, активируемый эндотоксинами в каскаде ферментативных реакций, проистекающих в амебоцитах. Под воздействием эндотоксинов фактор С переходит в свою активную форму, которая расщепляет синтетический флуорогенный субстрат, результатом чего является высвобождение флуорофора. Далее развитие флуоресценции измеряется с помощью флуориметра. Измерение производится дважды - в начальный период времени сразу после добавления реактивов и через один час. Метод с использованием рекомбинантного фактора С был официально принят Европейской фармакопеей в 2021 году как самостоятельный фармакопейный анализ, альтернативный ЛАЛ-тесту.

Позже появились новые рекомбинантные реактивы, которые полностью воспроизводят каскад сериновых протеаз амебоцитов мечехвоста. Они состоят их трех рекомбинантных факторов (фактора В, фактора С и просвертывающего фермента) и позволяют определять эндотоксины с высокой чувствительно-стью и специфичностью за счет расщепления хромогенного субстрата, содержащего хромофор пара-нитроанилин. Точно такой же принцип лежит и в ос-нове хромогенного кинетического анализа с использованием хромогенного ЛАЛ-реактива. При этом анализ проводится в кинетике с помощью того же спектрофотометра и программного обеспечения, которые используются и для проведения традиционных кинетических анализов. Все рекомбинантные реактивы не взаимодействуют с β-D-глюканами, так как не содержат фактора G, то есть, являются высокоспецифичными именно для определения бактериальных эндотоксинов. Внедрение в практику данных реактивов полностью исключает использование гемолимфы мечехвостов.