Тест активации моноцитов

Тест ак­ти­ва­ции мо­но­ци­тов (МАТ) – это но­вый ме­тод опре­де­ле­ния пол­но­го спек­тра пи­ро­ген­ных ве­ществ, вклю­чая бак­те­ри­аль­ные эн­до­ток­си­ны и пи­ро­ге­ны не­эн­до­ток­си­но­вой при­ро­ды (пеп­ти­док­г­ли­ка­ны, дро­ж­жи, гри­бы, ви­ру­сы). Тест яв­ля­ет­ся пол­ной за­ме­ной ана­ли­за на пи­ро­ген­ность, про­во­ди­мо­го на кро­ли­ках, и поз­во­ля­ет от­ка­зать­ся от ис­поль­зо­ва­ния жи­вот­ных. Дан­ный ме­тод осо­бен­но ак­туа­лен для про­вер­ки им­му­но-био­ло­ги­че­ских пре­па­ра­тов – вак­цин, сыво­ро­ток, аль­бу­ми­нов, про­вер­ка ко­то­рых в ЛАЛ-те­сте не все­гда воз­мож­на из-за силь­но­го вли­я­ния ком­по­нен­тов пре­па­ра­та на ре­ак­цию эн­до­ток­си­нов с ЛАЛ-ре­ак­ти­вом.

В ос­но­ве ме­то­да ле­жит спо­соб­ность кле­ток кро­ви мо­но­ци­тов об­ра­зо­вы­вать в при­сут­ствии пи­ро­ген­ных ве­ществ при­род­ный ме­ди­а­тор вос­па­ле­ния – ин­тер­лейкин-6. Эта же ре­ак­ция про­ис­хо­дит и в на­шем ор­га­низ­ме in-vivo при по­па­да­нии пи­ро­ген­ных ве­ществ в кро­вя­ное рус­ло. Ана­лиз про­во­дит­ся в два эта­па: на пер­вом эта­пе рас­твор ис­пыту­е­мо­го пре­па­ра­та с мо­но­ци­та­ми ин­ку­би­ру­ют в СО2-ин­ку­ба­то­ре при тем­пе­ра­ту­ре 37 °С в те­че­ние 18-22 ча­сов, под­го­тов­ку кле­ток и рас­тво­ров ис­пыту­е­мых пре­па­ра­тов и кон­тро­лей не­об­хо­ди­мо про­во­дить в ла­ми­на­ре, со­блю­дая все пра­ви­ла ра­бо­ты с клет­ка­ми. На вто­ром эта­пе опре­де­ля­ют со­дер­жа­ние вы­де­лив­ше­го­ся ин­тер­лейки­на-6 с по­мо­щью ме­то­да ИФА. Ка­либ­ро­воч­ную кри­вую стро­ят с по­мо­щью рас­тво­ров стан­дар­та эн­до­ток­си­на. Оп­ти­че­скую плот­ность рас­тво­ров из­ме­ря­ют при дли­не вол­ны 450 нм на стан­дарт­ном спек­тро­фо­то­мет­ре.

Мы пред­ла­га­ем го­то­вые к ис­поль­зо­ва­нию на­бо­ры для про­ве­де­ния те­ста на ак­ти­ва­цию мо­но­ци­тов, в ко­то­рые вхо­дят все не­об­хо­ди­мые для ана­ли­за ком­по­нен­ты. Ос­но­ву на­бо­ров со­став­ля­ют крио­кон­сер­ви­ро­ван­ные мо­но­ци­ты, по­лу­чен­ные из пе­ри­фе­ри­че­ской кро­ви че­тырех здо­ро­вых до­но­ров. Фла­кон с мо­но­ци­та­ми дол­жен хра­нить­ся при тем­пе­ра­ту­ре -80 °С и ни­же. Так­же в на­бо­ры вхо­дят: стан­дарт эн­до­ток­си­на и не­эн­до­ток­си­но­вые кон­тро­ли, культу­раль­ная сре­да для раз­ве­де­ния кле­ток и пре­па­ра­тов, сте­риль­ный план­шет и го­то­вый на­бор ИФА для опре­де­ле­ния со­дер­жа­ния ин­тер­лейки­на-6, ва­ли­ди­ро­ван­ный с мо­но­ци­та­ми, вхо­дя­щи­ми в на­бор.

Также для проведения анализа необходимы: вода для ЛАЛ-теста и пробирки для разведений 12х75 или 13х100 мм.