Тест активации моноцитов

Тест активации моноцитов (МАТ) – это новый метод определения полного спектра пирогенных веществ, включая бактериальные эндотоксины и пирогены неэндотоксиновой природы (пептидокгликаны, дрожжи, грибы, вирусы). Тест является полной заменой анализа на пирогенность, проводимого на кроликах, и позволяет отказаться от использования животных. Данный метод особенно актуален для проверки иммуно-биологических препаратов – вакцин, сывороток, альбуминов, проверка которых в ЛАЛ-тесте не всегда возможна из-за сильного влияния компонентов препарата на реакцию эндотоксинов с ЛАЛ-реактивом.

В основе метода лежит способность клеток крови моноцитов образовывать в присутствии пирогенных веществ природный медиатор воспаления – интерлейкин-6. Эта же реакция происходит и в нашем организме in-vivo при попадании пирогенных веществ в кровяное русло. Анализ проводится в два этапа: на первом этапе раствор испытуемого препарата с моноцитами инкубируют в СО2-инкубаторе при температуре 37 °С в течение 18-22 часов, подготовку клеток и растворов испытуемых препаратов и контролей необходимо проводить в ламинаре, соблюдая все правила работы с клетками. На втором этапе определяют содержание выделившегося интерлейкина-6 с помощью метода ИФА. Калибровочную кривую строят с помощью растворов стандарта эндотоксина. Оптическую плотность растворов измеряют при длине волны 450 нм на стандартном спектрофотометре.

Мы предлагаем готовые к использованию наборы для проведения теста на активацию моноцитов, в которые входят все необходимые для анализа компоненты. Основу наборов составляют криоконсервированные моноциты, полученные из периферической крови четырех здоровых доноров. Флакон с моноцитами должен храниться при температуре -80 °С и ниже. Также в наборы входят: стандарт эндотоксина и неэндотоксиновые контроли, культуральная среда для разведения клеток и препаратов, стерильный планшет и готовый набор ИФА для определения содержания интерлейкина-6, валидированный с моноцитами, входящими в набор.

Также для проведения анализа необходимы: вода для ЛАЛ-теста и пробирки для разведений 12х75 или 13х100 мм.