Хромогенный тест по конечной точке

Хро­мо­ген­ный ме­тод по ко­неч­ной точ­ке (ме­тод Е) - это ин­стру­мен­таль­ный ме­тод, не тре­бу­ю­щий спе­ци­аль­но­го ки­не­ти­че­ско­го фо­то­мет­ра и слож­но­го про­грамм­но­го обес­пе­че­ния. Из­ме­ре­ние мож­но про­во­дить на обыч­ном ла­бо­ра­тор­ном спек­тро­фо­то­мет­ре. Ме­тод ос­но­ван на раз­ви­тии жел­то­го окра­ши­ва­ния ре­ак­ци­он­ной сме­си в при­сут­ствии эн­до­ток­си­нов. Ин­тен­сив­ность это­го окра­ши­ва­ния пря­мо про­пор­ци­о­наль­на со­дер­жа­нию эн­до­ток­си­нов в об­раз­це. Ана­лиз про­хо­дит в два эта­па. На пер­вом эта­пе ис­пыту­е­мый об­ра­зец в выбран­ном раз­ве­де­нии сме­ши­ва­ют с ЛАЛ-ре­ак­ти­вом в 96-ти лу­ноч­ном план­ше­те и ин­ку­би­ру­ют в тер­мо­б­ло­ке при тем­пе­ра­ту­ре 37°C от 10 до 20 ми­нут, в за­ви­си­мо­сти от выбран­но­го диа­па­зо­на ка­либ­ро­воч­ной кри­вой. За­тем до­бав­ля­ют рас­твор хро­мо­ген­но­го суб­стра­та и ин­ку­би­ру­ют смесь еще в те­че­ние 6 ми­нут, та­ким об­ра­зом, об­щее вре­мя ре­ак­ции со­став­ля­ет не бо­лее 30 ми­нут. По­сле это­го ре­ак­цию при­ну­ди­тель­но оста­нав­ли­ва­ют стоп-ре­а­ген­том и про­во­дят из­ме­ре­ние оп­ти­че­ской плот­но­сти ре­ак­ци­он­ной сме­си при дли­не вол­ны 405 нм. Кон­цен­тра­ция эн­до­ток­си­нов в ис­пыту­е­мом об­раз­це рас­счи­ты­ва­ет­ся с по­мо­щью стан­дарт­ной ка­либ­ро­воч­ной кри­вой.

Так как ре­ак­тив для хро­мо­ген­но­го ана­ли­за со­дер­жит ис­кус­ствен­ный хро­мо­ген­ный суб­страт, ре­зульта­ты ана­ли­за с ис­поль­зо­ва­ни­ем дан­но­го ре­ак­ти­ва ме­нее под­вер­же­ны ин­ги­би­ро­ва­нию со сто­ро­ны ис­пыту­е­мо­го пре­па­ра­та по срав­не­нию с гель-тромб те­стом или ки­не­ти­че­ским тур­би­ди­мет­ри­че­ским те­стом.

Дан­ный ме­тод мо­жет быть ис­поль­зо­ван, ко­г­да не­об­хо­ди­мо ко­ли­че­ствен­но опре­де­лить со­дер­жа­ние эн­до­ток­си­нов в био­ло­ги­че­ских об­раз­цах и пре­па­ра­тах, но нет воз­мож­но­сти по­ста­вить ки­не­ти­че­ский хро­мо­ген­ный ана­лиз.