В приборе Vi-CELL BLU появилась возможность считывания планшетов впервые в семействе анализаторов клеток Vi-CELL. Данная опция дает возможность загружать до 96 образцов или комбинацию образцов и контролей в прибор для продолжительных испытаний.
Однако тестирование такого большого количества образцов приводит к значительному увеличению времени пробега (около 3 часов для полного 96-луночного планшета). Несомненно, появляются вопросы о использовании прибора в течение такого длительного времени или адекватности результатов у клеток, которые нестабильны вне инкубационной среды.
Для решения данной проблемы, Vi-CELL BLU оснащен опциональным режимом работы «FAST», который можно использовать в конфигурации с планшетом или каруселью для сокращения время тестирования. Данный режим сокращает продолжительность цикла промывки, за счет чего экономится, примерно, 30% времени всего тестирования.
Однако, мы не скрываем того, что стоит умеренно пользоваться данным режимом, в зависимости от типа образца и поставленных временных рамок. Необходимо понимать, что сокращение времени промывки повышает риск загрязнения при переходе между образцами. А длительное использование «FAST» режима может привести к накоплению трипанового синего и белка в жидкостных каналах прибора. Поэтому мы рекомендуем проводить регулярную деконтаминацию.
Настройка «FAST» режима
Благодоря интуитивно понятному софту прибора включение «FAST» режима не вызовет никаких трудностей. Его можно выставлять по умолчанию в настройках или же выбрать для каждого отдельного образца.
Оценка прогона переноса
Базовый алгоритм оценки переноса частиц состоит в том, чтобы чередовать образец с нулевым образцами буфера (бланками) на планшете либо в каруселе, при этом работать в обычном режиме или с включенным «FAST» режимом. Пример такого прогона показано ниже.
Стандартные частицы размера L5 (6602794, серия 9012057F) использовались в примере в качестве общего контроля из-за их номинального размера и приблизительной плотности частиц ~ 4 × 10^6 частиц/ мл. Прибор запускался с использованием профиля считывания, настроенного для частиц L5 на основе профиля частиц L10 по умолчанию.
Клетки СНО представляют собой стандартный тип клеток, который используется для определения переноса частиц п
ри тестировании биологических образцов. Абсолютная концентрация составила около 3 × 10^6 клеток / мл, но это не является критическим параметром, поскольку основная цель исследования - это отношение количества клеток между нормальным и нулевыми образцами (бланками). Анализ проводился по стандартному профилю (протоколу) для клеток млекопитающих.
Концентрация частиц не была критической, но использовалась как показатель ожидаемой эффективности. Регистрировалось количество частиц между образцом и холостыми пробами (бланками). Остаточный перенос определялся по количеству частиц, которые появились в холостых пробах. Также провели анализ случайных изображений, чтобы убедиться, что частицы, обнаруженные в бланках, не были инородным частицами.
Как и предполагалось, при тестировании хостых проб, в них были зафиксированы видимые различия в количествах частиц. Это вызывает некоторые проблемы с внутренними вычислениями, поэтому среднее число частиц является наиболее приемлемым параметром для использования.
Результаты
Настройки прибора для анализа Результаты, приведенные ниже, показывают несколько прогонов при загрузке образцов в карусель и планшеты. Данные представлены в виде парных результатов, отражающих среднее число выборок и среднее значение переноса зафиксированного между образцами.L5 Частицы
CHO клетки
Выводы
Анализ T-критерия между количествами остаточных частиц в бланках при нормальной и быстрой промывках дает значение p 0,986, что указывает на отсутствие статистически значимого различия между режимами работы, с точки зрения переноса между образцами. Это доказывает, что можно использовать прибор в любом режиме и быть уверенным, что перенос от образца к образцу незначителен. Следует отметить, что степень изменчивости в нулевых образцах может быть чрезвычайно высокой из-за того, что подсчитывается малое количество частиц, но во всех тестовых случаях процент переноса всегда был значительно ниже 1%.
оригинал статьи