Набор реагентов RNAGEM для выделения РНК, MicroGEM

Температуроуправляемая однопробирочная экстракция РНК из клеток млекопитающих, тканей, насекомых, бактерий и вирусов

Описание набора RNAGEM:

RNAGEM подходит для экстракции нуклеиновых кислот и обеспечивает простое выделение РНК из одной клетки или из популяции в объеме до 100 000 клеток. В набор входят ферменты, не содержащие РНКазы, буферы и ДНКаза I.

Методика обладает широкой специфичностью и подходит для экстракции материала из малых образцов, таких как экзосомы или отдельные клетки, без необходимости использования агрессивных химикатов или дополнительной очистки.

Типы образцов:

• Клеточные культуры млекопитающих;
• Клетки, полученные микродиссекцией лазерным захватом (LCM);
• Клетки, полученные путем клеточной сортировки с активацией флуоресценции / (FACS)-подготовленные клеточные популяции

Особенности:

• Оптимальный набор для получения РНК из клеток млекопитающих (суспензии, адгезивных клеток, хранящихся в реагенте RNAlater TM, и клеточных осадков);
• Упрощенный рабочий процесс без вмешательства пользователя позволяет получить готовые РНК, которые можно использовать в ОТ-ПЦР и ОТ-КПЦР примерно за 5 минут;
• Выделение РНК и ДНК с высокой степенью восстановления при работе с разным количеством клеток;
• Не требует дополнительной очистки при подготовке к ОТ-ПЦР и ОТ-КПЦР;
• Отсутствие ингибиторов позволяет не использовать жесткие химические реагенты для промывки в несколько этапов;
• Реагенты ОТ-ПЦР и ОТ-КПЦР могут быть добавлены непосредственно в лизат в 96-луночные планшеты;
• Каждый набор содержит RNAGEM, ДНКазу I, BLUE буфер, 10х ДНКазный буфер и 10х ТЕ буфер

Возможные комплектации наборов:

Выделение РНК из биологических образцов затруднено присутствием РНКаз, которые разрушают РНК. Набор RNAGEM MicroGEM позволяет выделять молекулы как из культуры клеток, так и из единичных клеток.

Известно, что экстракция РНК представляет собой сложный процесс из-за низкой стабильности молекул РНК и большого количества РНКаз. Набор RNAGEM от MicroGEM решает эту проблему с помощью чрезвычайно быстрой экстракции нуклеиновой кислоты и контролем температуры реакции. Реагентика легко адаптируется к диапазону объемов экстракции и может масштабироваться в зависимости от количества клеток.

После экстракции проводится обработка ДНКазой (необязательно) для обогащения РНК. Эти реагенты могут быть добавлены непосредственно к образцу РНК для протокола под 96-луночные планшеты. RNAGEM оптимизирован для работы с различными типами культур, включая клетки в суспензии, адгезионные культуры, клетки, хранящиеся в RNAlater ™, осадки, а также клеточные популяции, полученные методом FACS и LCM.

Дополнительно молекулы РНК можно очистить добавлением ДНКазы (входит в комплект), в связи с чем протокол увеличивается на 10 минут. На рисунке показан рабочий процесс совместной очистки и экстракции РНК.

Реагенты набора RNAGEM совместимы с полимеразами и обратными транскриптазами. Полученные экстракты можно использовать без очистки для ПЦР, ОТ-ПЦР, qПЦР и ОТ-qПЦР. Это приводит к гораздо большей чувствительности и линейности в широком диапазоне.

Полученные графики отображают результаты добавления полученных экстрактов РНК (из клеток HeLa) в реакцию в RT-qPCR. Клетки в количестве от 10 до 50 000 были обработаны реагентикой RNAGEM. Графики включают информацию о мРНК с высоким содержанием (ACTB; ß-актин) и мРНК с низким содержанием (BRCA1; ранняя стадия рака груди). Чистые кривые с градиентами, которые сопоставимы со стандартами, демонстрируют отсутствие ингибирования, а графики, полученные 10 клеток, демонстрируют чувствительность метода.

Графики RT-qPCR для РНК, экстрагированной из серии разведений клеток HeLa от 10 до 50 000 клеток. A: мРНК с высоким числом копий (ACTB) B: мРНК с низким числом копий (BRCA1). Красный = стандарты; Синий = повторяющиеся кривые мРНК.

При использовании рекомендованного метода эффективность экстракции RNAGEM остается постоянной в диапазоне от 1 до примерно 100 000 клеток и дает оптимальный выход. Напротив, экстракция TRIzol® теряет мРНК из клеток с низким содержанием. Это означает, что нормализация образца может быть получена с помощью простой количественной ПЦР кДНК в экстракте, не обработанном ДНКазой. Различные диапазоны линейности могут быть получены путем небольших изменений базовой процедуры, как показано ниже.

БРОШЮРЫ:

• Quick-Start Guide: RNAGEM
• Safety Data Sheet: RNAGEM
• RNAGEM Technical Product Review May 2020