Материалом для исследования служат сухие пятна крови (или DBS, от англ. Dried Blood Spot), получаемые в роддоме путем отбора нескольких капель крови у новорожденного и их высушивания на специальной карточке. Определение концентраций аминокислот, свободного карнитина, ацилкарнитинов, аденозина с использованием набора реагентов «АЛМАСС Нео» включает следующие этапы:
- экстракцию аналитов из высушенных пятен крови раствором, содержащим меченые стабильными изотопами внутренние стандарты;
- анализ с использованием системы тандемной масс-спектрометрии (МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (MRM);
- количественную оценку результата по отношению к отклику соответствующего внутреннего стандарта известной концентрации.
На этапе пробоподготовки сухие пятна крови инкубируют с экстракционным раствором, который содержит меченые стабильными изотопами внутренние стандарты и реагент для определения сукцинилацетона (гидразин дигидрохлорид). В крови сукцинилацетон находится в связанном с белками плазмы виде, Гидразин дигидрохлорид обеспечивает экстрагирование сукцинилацетона из белковых комплексов за счет дериватизации его до 3-(5-метил-1H-пиразол-3-ил) пропановой кислоты.
Подготовленные пробы анализируют с использованием системы тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) в режиме мониторинга множественных реакций (MRM). Полученный отклик аналита сравнивают с откликом соответствующего внутреннего стандарта и на основе известной концентрации внутреннего стандарта определяют содержание аналита. Результат, получаемый по каждому аналиту, пропорционален концентрации аналита в исследуемом образце.
